RPMI 1640 -
۳-۱-۲) وسایل و دستگاه های مورد استفاده:
میکروپلیت۹۶خانه ای استریل(ساخت سوئیس)
RapID TM Yeast Plus System ( remel, USA ) کیت تجاری با نام-
- گرم خانه (شکل-۱)
- اتوکلاو (شکل-۲)
- هود لامینار (شکل-۳)
- میکروسکوپ نوری (شکل-۴)
- دستگاه کروماتو گرافی متصل به طیف سنج جرمی
( Clevenger type apparatus ) دستگاه تقطیر-
- فیلتر
- ترازوی دیجیتال
- لام ساده
- لوله استریل
- لام نئوبار
- سوآپ استریل
- پلیت استریل
- لوپ
- آنس
- میکروتیوب
- لوله اپندرف
- چسب اسکاچ
- پارافیلم
- سمپلر
- سر سمپلر های آبی و زرد استریل
- یخچال
- ارلن
- بشر
- قیچی
- فندک
شکل ۳-۱: گرم خانه
شکل۳ -۲ : اتوکلاو
شکل۳ – ۳ : هود لامینار
شکل ۳– ۴ : میکروسکوپ نوری
۳-۲) مواد و روش ها:
۳-۲-۱) جمع آوری نمونه ها:
این مطالعه در طی مدت ۱۸ ماه که از فروردین ۱۳۹۱تا شهریور۱۳۹۲انجام شد.که در کنار این مطالعه توصیفی با بهره گرفتن از پرسشنامه انجام شد.
جمعیت مورد مطالعه شامل زنانی بود که در طی یک سال گذشته ۳ بار و یا بیشتر ولوواژینیت کاندیدایی را تجربه کرده بودند.در این پژوهش۴ مرکز بهداشتی- درمانی که وابسته به دانشگاه علوم پزشکی وخدمات درمانی گناباد بود انتخاب گردید.
و سپس پرسشنامه ای با مطالعه کتب ومقالات علمی مشتمل بر سؤالاتی در ارتباط با مشخصات فردی، وضعیت تأهل، وضعیت بارداری، سابقه استفاده از داروی فلوکونازول، سابقه استفاده از داروهای ضدقارچی و داروهای دیگر، وضعیت سیستم ایمنی، طول دوره درمان وشدت علایم تدوین شد.
سپس پژوهشگر به مراکز بهداشتی- درمانی مورد نظر مراجعه و پس از معرفی خود به هر یک از واحد های مورد پژوهش، هدف از انجام پژوهش را بازگو نموده وپس از اعلام رضایت آنها، پرسشنامه ها دراختیار ماماها ومتخصص زنان که در این مرکز بودند قرار گرفت.
سپس بیمارانی که به این مرکز مراجعه کردند وبر اساس شواهد بالینی وشرح حال قبلی برایشان تشخیص احتمالی RVVC داده شده بود انتخاب گردید وبا أخذ رضایت از آنان پرسشنامه ها تکمیل گردید.
(( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت nefo.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. ))
سپس جهت بررسی آزمایشگاهی، فرد در حالت لیتاتومی جهت معاینه قرار می گرفت و با گذاشتن اسپاکولوم و با بهره گرفتن از ۲سوآپ پنبه ای استریل، ۲ نمونه از ترشحات دهانه سرویکس و واژن برداشته می شد.
یک نمونه از این ترشحات، جهت بررسی میکروسکوپی استفاده شد.
۳-۲-۲) بررسی مستقیم میکروسکوپی:
مقداری از هر نمونه بر روی لام تمیز قرار گرفت و با بهره گرفتن از پتاس ۱۵% شفاف شد. نمونه هایی که حاوی عناصر قارچی به شکل سلول های مخمری گرد و بیضی به قطر ۵-۳ میکرومتر همواره یا بدون جوانه و میسلیوم بودند، برای کشت و جداسازی و شناسایی گونه های کاندیدا مورد استفاده قرار گرفتند.
۳-۲-۳)کشت روی محیط:
نونه دوم جهت کشت، در محیط سابورودکستروز آگار حاوی کلرامفنیکل کشت خطی داده شد. سپس اطراف پلیت ها توسط چسب محکم گردید و شماره گذاری گردیدند و به مدت ۴۸ الی ۷۲ ساعت در دمای ۳۰ درجه سانتی گراد در گرم خانه نگه داری شدند. پلیت های کشت، روزانه از نظر رشد کلنی های قارچی مورد بررسی قرار گرفتند. تعداد نمونه ها۲۰ عدد می باشد. ( شکل-۵ )
تهیه محیط کشت سابورو دکستروز آگار:
۶۵ گرم از پودر محیط سابورو دکستروز آگار را در یک لیتر آب مقطر حل کرده، پس ازجوشاندن وشفاف شدن محیط، کلرامفنیکل به محیط اضافه کردیم. سپس محیط در اتوکلاو قرار گرفت و در فشار ۱۵پوند بر اینچ مربع در دمای ۱۲۱ درجه سانتی گراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل گردید. و سپس محیط آماده شده به پلیت ها منتقل گردید. همه اعمال انجام شده در کنار شعله انجام گرفت. ( شکل-۶ )
شکل۳ – ۵ : کشت کاندیدا روی محیط سابرو دکستروز آگار
شکل۳- ۶ : محیط سابرودکستروز آگار ( قبل از کشت قارچ )
۳-۲-۴) تشخیص آزمایشگاهی گونه های کاندیدا :
برای تشخیص گونه های مخمری از آزمایشات مختلف فنوتایپی و بیوشیمیایی و در صورت نیاز مولکولی استفاده شد. برای تشخیص جدایه از آزمایشات زیر استفاده شده است.
- بررسی پرگنه در محیط کروم آگار کاندیدا
